Co-localización de la proteína centroamérica CenH3 con ADN satélite en células S2 de Drosophila melanogaster
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Date
2018
Authors
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Publisher
Pontificia Universidad Javeriana de Cali
Abstract
El centrómero, es la estructura que facilita la asociación de los microtúbulos del huso mitótico, la cohesión de las cromátidas, el movimiento cromosómico y el traslado de las cromátidas a los polos del huso durante la anafase. Por lo tanto, el centrómero es un actor fundamental de la herencia cromosómica y un marcador epigenético. En la mayoría de los organismos multicelulares, la composición de ADN de los centrómeros están compuestos por una familia específica de secuencias cortas repetidas en tándem que comprenden generalmente de 100-400 pb de longitud. Estas regiones repetitivas se conocen como ADN satélite y están altamente asociadas a regiones heterocromáticas, principalmente en áreas centroméricas, que podrían visualizarse mediante técnicas de fluorescencia. Las técnicas como la inmunofluorescencia (IF) y la hibridación in situ fluorescente (FISH) incluyen un mejor alcance en la ubicación de la sonda y el uso de sistemas de imágenes de resolución para la visualización directa de proteínas y ácidos nucleicos, lo que permite estudios futuros en términos de la dinámica transcripcional subcelular de muchos genes y revela sus funciones en diversos procesos biológicos. La técnica de IF acoplada a FISH (IF-FISH) con ADN satélite en células S2, son técnicas candidatas adecuadas para evidenciar posibles interacciones y relaciones causales de proteína-ADN. Sin embargo, los desafios presentados en un ánalisis de IF-FISH son, por un lado, la preservación de la organización nuclear, el epítopo detectado por el anticuerpo (IF) y, por otro lado, la penetración correcta de la sonda FISH para la detección de las regiones cromosomales (ADN FISH) (Chaumeli et al., 2006). En este estudio se implementó la técnica de Inmunofluorescencia (IF) en células S2 para la localización de la proteína CenH3, conocida en vertebrados como CENP-A y CID en Drosophila melanogaster. Sin embargo, la técnica aportó pocos resultados para la visualización de la proteína centromérica CenH3; el uso de la técnica IF en células S2 representó un exitoso ya que permitió la observación de estructuración nuclear y citoesquelética de las células S2. No obstante, los resultados obtenidos en este estudio, son beneficiosos para la técnica, ya que permiten mejorar el conocimiento para el éxito en microscopía, determinando la relación entre el implante, sus variables en la concentración y el tiempo de reacción de la técnica de inmunofluorescencia.